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高效液相色谱进样器的分类及使用注意事项   

2021-03-02 [184]
 高效液相色谱早期使用隔膜和停流进样器,装在色谱柱入口处,现在大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求:密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。
  HPLC进样方式可分为:隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。
  1.隔膜进样。用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内,可把样品直接送到柱头填充床的中心,死体积几乎等于零,可以获得的柱效,且价格便宜,操作方便。但不能在高压下使用(如10MPA以上);此外隔膜容易吸附样品产生记忆效应,使进样重复性只能达到1~2%;加之能碉各种溶剂的橡皮不易找到,常规分析使用受到限制。
  2.停流进样。可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”,另一缺点是保留时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中,效果较好。
  3.阀进样。一般HPLC分析常用六通进样阀,其关键部件由圆形密封垫子(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积在存在,柱效率低于隔膜进样(约下降5~10%左右),但耐高压(35~40MPA),进样量准确,重复性好(0.5%),操作方便。
  六通阀进样方式有部分装液法和完全装液法两种。
  ①用部分装液法进样时,进样量应不大于定量环体积的50%(多75%),并要求每次进样体积准确、相同。此法进样的准确度和重复性决定于注器取样的熟练程度,而且易产生由进样引起的峰展宽。
  ②用完全装液法进样时,进样量应不小于定量环体积的5~10倍(少3倍),这样才能完全置换定量环内和流动相,消除管壁效应,确保进样的准确度及重复性。
  六通阀使用和维护注意事项
  ①样品溶液进样前必须用0.45UM滤膜过滤,以减少微粒对进样阀的磨损。
  ②转动阀芯时不能太慢,更不能停留在中间位置,否则流动相受阻,使泵内压力剧增,甚至超过泵的大压力;转到进样位时,过高的压力将使柱头损坏。
  ③为防止缓冲盐和样吕残留在进样阀中,每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗,或先用能溶解样品的溶剂冲洗,再用水冲洗。
  4.自动进样。用于大量样品的常规分析。